96 لوحة جيدا ماوس ELISA كيت / ماوس Resistin ساندويتش ELISA كيت حسب الطلب

96 لوحة لوحة الماوس Retn ELISA Kit ماوس Resistin ساندويتش ELISA كيت حسب الطلب

Cat.No E 0263Mo

نطاق المنحنى القياسي : 0.3ng / ml - 90ng / ml

حساسية : 0.13ng / مل

الحجم : 96 بئرا

* هذا المنتج مخصص للاستخدام في الأبحاث فقط ، وليس للاستخدام في إجراءات التشخيص. يوصى بشدة بقراءة هذه التعليمات بالكامل قبل الاستخدام.

أنا عشت يو سي

هذه المجموعة من السندوتشات هي للكشف الكمي الدقيق للفأرة Nesfatin1 (المعروف أيضا باسم Retn) في المصل ، البلازما ، الخلايا الزلالية للمستنبات ، lysates الخلية ، homogenates الأنسجة.

A ssay P rictle

هذه المجموعة هي مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). تم تلبيس اللوحة مسبقًا باستخدام الأجسام المضادة لـ Mouse Retn. تتم إضافة Retn موجودة في العينة وتربط للأجسام المضادة المغلفة على الآبار. وبعد ذلك يتم إضافة الماوس Retot Antibody المرتبط ب biotinylated ويربط إلى Retn في العينة. ثم تتم إضافة Streptavidin-HRP ويربط الجسم المضاد Biotinylated Retn. بعد الحضانة غير منضبطة يتم غسل Streptavidin-HRP بعيدا أثناء خطوة الغسيل. ثم يتم إضافة حل الركيزة ويتطور اللون بما يتناسب مع كمية الماوس Retn. يتم إنهاء التفاعل بإضافة محلول توقف حمضي ويتم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر.

احتياطات P

• قبل الاستخدام ، يجب تدفئة الطقم والعينة بشكل طبيعي إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
• يجب اتباع هذه التعليمات بدقة في التجربة.
• بمجرد إزالة العدد المطلوب من الشرائط ، قم بإعادة ختم الكيس على الفور لحماية المتبقي من التدهور. تغطية جميع الكواشف عندما لا تكون قيد الاستعمال.
• تأكد من ترتيب pipetting ومعدل إضافة من جيدا إلى عندما الكواشف pipetting.
• يجب أن تكون نصائح الماصة ولحام السدادة في اليد نظيفة ويمكن التخلص منها لتجنب التلوث المتبادل.
• تجنب استخدام الكواشف من مجموعات مختلفة معا.
• حل Substate B حساس للضوء ، لا تعرض محلول الطبقة السفلية B للضوء لفترة طويلة.
• وقف الحل يحتوي على حمض. يرجى ارتداء حماية العين واليد والبشرة عند استخدام هذه المواد. تجنب ملامسة الجلد أو الأغشية المخاطية بعدة كاشف.
• لا ينبغي استخدام الطقم بعد تاريخ انتهاء الصلاحية.

جمع العينات

مصل المصل يسمح بالتجلط لمدة 10-20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. الطرد المركزي في 2000-3000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة.

البلازما جمع البلازما باستخدام EDTA أو الهيبارين كمضاد للتخثر. عينات الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة في 2000-3000 دورة في الدقيقة في 2 - 8 درجة مئوية في غضون 30 دقيقة من جمع.

البول جمع بواسطة أنبوب معقمة. الطرد المركزي في 2000-3000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة تقريبا. عند جمع السائل pleuroperitoneal والسائل الدماغي الشوكي ، يرجى اتباع الإجراءات المذكورة أعلاه.

الخلية C ulture S upernatant تجمع بواسطة أنابيب معقمة عند فحص مكونات سرية. الطرد المركزي في 2000-3000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة تقريبا. جمع supernatants بعناية. عند فحص المكونات داخل الخلية ، استخدم PBS (الرقم الهيدروجيني 7.2-7.4) لتخفيف تعليق الخلية لتركيز الخلية ما يقرب من 1 مليون / مل. تلف الخلايا من خلال دورات التجميد والذوبان المتكررة للسماح للمكونات الداخلية. الطرد المركزي في 2000-3000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة تقريبا.

نسج سوائل الجسم الأخرى شطف الأنسجة في PBS (الرقم الهيدروجيني 7.4) لإزالة الدم الزائد بدقة ويزن قبل التجانس. أنسجة اللحم المفروم وتجانسها في PBS (pH7.4) مع الخالط الزجاج على الجليد. ذوبان الجليد في 2-8 درجة مئوية أو تجميد عند -20 درجة مئوية. الطرد المركزي في 2000-3000 دورة في الدقيقة لمدة 20 دقيقة تقريبا.

R eagent P التعويض

يجب إحضار جميع الكواشف إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

المعيار إعادة تشكيل 120μl من المعيار (96ng / ml) مع 120μl من المخفف القياسي لتوليد حل المخزون القياسي 48ng / ml. دع المعيار يجلس لمدة 15 دقيقة مع التحريك اللطيف قبل إجراء التخفيفات. قم بإعداد النقاط القياسية المكررة من خلال تمييع محلول المخزون القياسي (48ng / ml) 1: 2 مع مخفف قياسي لإنتاج حلول 24ng / ml ، 12ng / ml ، 6ng / ml و 3ng / ml. يخدم المخفف القياسي كمعيار صفر (0 نانوغرام / مل). يجب تجميد أي محلول متبقي عند 20 ℃ واستخدامه خلال شهر واحد. تخفيف من الحلول القياسية المقترحة على النحو التالي:

Wash Buffer Dilute 20ml من Wash Wash Buffer Concentrate 30x في الماء منزوع الأيونات أو المقطر للحصول على 500 مل من 1x Wash Wash. إذا تشكلت البلورات في المركز ، فاخلطها بلطف حتى تذوب البلورات تمامًا.

A ssay P rocedure

1. إعداد جميع الكواشف والحلول القياسية والعينات حسب التعليمات. تقديم جميع الكواشف إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام. يتم إجراء الفحص في درجة حرارة الغرفة.

2. تحديد عدد الشرائط المطلوبة للمقايسة. أدخل الشرائط في الإطارات للاستخدام. يجب تخزين الشرائط غير المستخدمة في 2-8 درجة مئوية.

3. إضافة معيار 50μl إلى معيار جيد. ملاحظة : لا تضيف أي جسم مضاد إلى البئر القياسي لأن المحلول القياسي يحتوي على جسم مضاد حيوي.

4. إضافة عينة 40μl إلى عينة من الآبار ثم إضافة 10μl ضد الأجسام المضادة Retn لعينة الآبار ، ثم إضافة 50μl streptavidin-HRP إلى عينات الآبار والآبار القياسية (ليس بآلية التحكم الفارغة). اخلط جيدا. تغطية لوحة مع السداده. احتضان 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

.5 ﻗﻢ ﺑﺈزاﻟﺔ اﻟﺴﺪادة واﻏﺴﻞ اﻟﺼﻔﻴﺤﺔ 5 ﻣﺮات ﺑﻤﺤﻄﺔ اﻟﻐﺴﻞ. نقع الآبار مع ما لا يقل عن 0.35 مل عازلة غسل لمدة 30 ثانية إلى 1 دقيقة لكل غسل. لغسيل أوتوماتيكي ، ينضح جميع الآبار ويغسل 5 مرات بمحلول غسيل ، والآبار الزائدة مع عازلة الغسيل. صفي الصفيحة على مناشف ورقية أو مواد ماصة أخرى.

6. أضف 50μl من محلول الركازة A إلى كل بئر ثم أضف 50μl من محلول الركازة B إلى كل بئر. احتضان لوحة مغطاة بسداد جديد لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية في الظلام.

7. أضف 50μl Stop Solution إلى كل بئر ، سيتغير اللون الأزرق إلى الأصفر على الفور.

8. حدد الكثافة الضوئية (قيمة التطوير التنظيمي) لكل بئر على الفور باستخدام القارئ الصغري المحدد على 450 نانومتر خلال 10 دقائق بعد إضافة حل التوقف.

Referances

"تعبير ريسيستين و RELM-alpha في الأنسجة الدهنية البيضاء من الفئران المرضعة."
Bing C.، Gomez-Ambrosi J.، Zabalegui N.، Williams G.، Trayhurn P.
الكيميائية الحيوية. Biophys. احتياط COMMUN. 296: 458-462 (2002)